Luận Văn Khảo sát quy trình sản xuất enzyme cellulase từ nấm Trichoderma Reesei

MỤC LỤC
Danh sách các từ viết tắt v
Danh sách các bảng . vi
Danh sách các hình vii
CHƯƠNG 1: MỞ ĐẦU . 1
1.1. Đặt vấn đề 1
1.2. Mục tiêu của đề tài 2
1.2.1. Mục tiêu tổng quát 2
1.2.2. Mục tiêu cụ thể 2
CHƯƠNG 2: TỔNG QUAN . 3
2.1. Sàng lọc các chủng vi sinh vật sản xuất enzyme cellulase ngoại bào . 3
2.2. Giới thiệu về Trichoderma Reesei . 4
2.2.1. Lịch sử nguyên cứu Trichoderma 4
2.2.2. Nuôi cấy Trichoderma Reesei trên môi trường bã mía kết hợp cám mì . 5
2.2.3. Hình thái của Trichoderma Reesei 5
2.2.4. Đặc điểm . 6
2.2.5. Ứng dụng . 8
2.2.5.1. Lương thực và nghành dệt . 8
2.2.5.2. Chất kiểm soát sinh học 8
2.2.5.3. Kích thích sự tăng trưởng của cây trồng 8
2.2.5.4. Nguồn gen sử dụng trong chuyển gel . 8
2.2.5.5. Biện pháp canh tác hữu cơ . 9
2.3. Giới thiệu sơ lược về enzyme . 10
2.4. Giới thiệu sơ lược về protease 12
2.4.1. Ứng dụng của protease . 13
2.5. Sơ lược về enzyme cellulase thu nhận từ Trichoderma Reesei 15
2.5.1. Cơ chế hoạt động của enzyme cellulase 16
2.5.2. Tính chất hóa lý của enzyme cellulase 18
2.5.3. Ứng dụng của enzyme cellulase 19
2.5.4. Các nguồn thu nhận enzyme[SUB] [/SUB][SUB]19[/SUB]
2.6. Kỹ thuật cơ bản chuẩn bị dịch protein thô 19
2.7. Cố định enzyme 20
2.7.1. Định nghĩa cố định enzyme . 20
2.7.2. Ưu nhược điểm của cố định enzyme 20
2.7.3. Các yếu tố ảnh hưởng đến hoạt tính của enzyme cố định . 21
2.7.4. Phương pháp cố định enzyme 21
2.7.5. Ứng dụng của enzyme cố định 22
2.7.5.1. Trong công nghiệp 22
2.7.5.2. Trong y học . 22
2.7.5.3. Trong nghiên cứu khoa học 23
2.7.5.4. Trong bảo vệ môi trường . 23
2.7.6. Tình hình nguyên cứu trong và ngoài nước . 24
2.7.6.1. Tình hình nguyên cứu trong nước 24
2.7.6.2. Tình hình nguyên cứu ngoài nước . 24
CHƯƠNG 3:VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU NUÔI CẤY 26
3.1. Thiết bị và hóa chất . 26
3.1.1. Thiết bị . 26
3.1.2. Hóa chất . 28
3.2. Quy trình thu nhận dịch chiết enzyme thô 28
3.2.1. Thuyết minh quy trình 29
3.3. Xác định hàm lượng, hoạt tính của enzyme cellulase . 31
3.3.1. Xác định hàm lượng enzyme cellulase theo phương pháp Baradford . 31
3.3.2. Xác định hoạt tính enzyme cellulase 33
3.4. Khảo sát sự ảnh hưởng của môi trường, độ ẩm, thời gian, nhiệt độ tối ưu, độ pH tối thích đến sinh tổng hợp enzyme cellulase 35
3.4.1. Nghiên cứu thành phần môi trường đến sinh tổng hợp enzyme cellulase 35
3.4.2. Nghiên cứu ảnh hưởng của thời gian đến sinh tổng hợp enzyme cellulase 36
3.4.3. Nghiên cứu ảnh hưởng của độ ẩm đến sinh tổng hợp enzyme cellulase 37
3.4.4. Xác định độ pH tối ưu cho sinh tổng hợp enzyme cellulase . 37
3.4.5. Xác định nhiệt độ tối ưu cho sinh tổng hợp enzymecellulase 38
3.5. Khảo sát tác nhân trợ tủa 38
3.5.1. Tủa protein-enzyme bằng muối, dung môi hữu cơ hoặc polymer 38
3.5.2. Tủa enzyme bằng muối (NH[SUB]4[/SUB])[SUB]2[/SUB]SO[SUB]4[/SUB] ở các nồng độ khác nhau 39
3.5.3. Tủa protein-enzyme bằng phức hợp nước và dung môi hữu cơ 39
3.5.4. Tủa protein-enzyme bằng các polymer trung tính 39
3.5.5. Tủa protein-enzyme bằng điểm đẳng điện . 40
3.6. Cố định enzyme cellulase trên chất mang Natriaginatel . 40
3.7. Tinh sạch enzyme . 41
3.7.1. Chuẩn bị hóa chất và dụng cụ 41
3.7.1.1. Dụng cụ và thiết bị . 41
3.7.1.2. Hóa chất . 41
3.7.1.3 Tinh sạch enzyme 41
3.8. Xác định trọng lượng phân tử bằng điện di trên gel Polyacrylamide 43
3.8.1. Giới thiệu về gel Polycrylamide 43
3.8.2. Vật liệu . 44
3.8.2.1. Dụng cụ và thiết bị 44
3.8.2.2. Hóa chất . 45
3.8.3. Phương pháp . 46
3.8.3.1. Đổ gel . 46
3.8.3.2. Chuẩn bị mẫu và chạy điện di 48
3.8.3.3. Xác định trọng lượng phân tử của protein 48
3.9. Khảo sát số lần tái sử dụng enzyme cellulase trên Natrialginate 49
CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 51
4.1. Kết Luận . 51
4.2. Đề Nghị . 51
Tài Liệu Tham Khảo 52
Phụ lục . 54