Luận Văn Khảo sát khả năng thay thế chất điều hòa sinh trưởng của Oligochitosan trên hai môi trường Murashige

MỤC LỤC
Trang tựa
Lời cảm ơn
Mục lục . i
Danh sách các chữ viết tắt v
Danh sách các hình vi
Danh sách các bảng vii
Danh sách các biểu đồ . viii
CHƯƠNG 1: GIỚI THIỆU
1.1 ĐẶT VẤN ĐỀ . 1
1.2 MỤC ĐÍCH . 2
1.3 YÊU CẦU . 2
CHƯƠNG 2: TỔNG QUAN
2.1 SƠ LƯỢC VỀ CHITIN, CHITOSAN VÀ OLIGOCHITOSAN . 3
2.1.1 Giới thiệu chung về Chitin, Chitosan và Oligochitosan 3
2.1.1.1 Chitin 3
2.1.1.2 Chitosan 6
2.1.1.3 Oligochitosan 9
2.1.2 Nguồn của Chitin, Chitosan, Oligochitosan 9
2.1.3 Phương pháp chế tạo Chitin, Chitosan, Oligochitosan 10
2.1.3.1 Phương pháp chế tạo Chitin 10
2.1.3.2 Phương pháp chế tạo Chitosan 11
2.1.3.3 Phương pháp chế tạo Oligochitosan 12
2.1.4 Ứng dụng của Chitin, Chitosan, Oligochitosan 17
2.1.4.1 Ứng dụng trong lĩnh vực nông nghiệp và công nghệ sinh học 17
2.1.4.2 Tác nhân cationic trong xử lý nước . 19
2.1.4.3 Chitosan dùng trong y học . 19
2.2 GIỚI THIỆU SƠ LƯỢC VỀ LAN DENDROBIUM THONGCHAI GOLD 21
2.2.1 Giới thiệu họ lan 21
2.2.1.1 Đặc điểm chung 21
2.2.1.2 Đặc điểm về phân loại . 23
2.2.2 Giới thiệu về Dendrobium thongchai gold . 25
2.2.2.1 Vị trí phân loại 25
2.2.2.2 Nguồn gốc và sự phân bố 25
2.2.2.3 Phân loại . 25
2.2.2.4 Đặc điểm về hình thái 26
2.2.2.5 Các điều kiện cơ bản để nuôi trồng lan Dendrobium sp 28
2.2.2.6 Giá trị kinh tế 31
2.2.2.7 Giới thiệu về lan Dendrobium thongchai gold . 31
2.3 SƠ LƯỢC VỀ KỸ THUẬT NHÂN GIỐNG IN VITRO 34
2.3.1 Sơ lược về các phương pháp nhân giống truyền thống . 31
2.3.2 Lịch sử và những thành tựu đạt được trong nuôi cấy mô thực vật . 34
2.3.3 Mục đích và ứng dụng thực tiễn . 36
2.3.3.1 Mục đích . 36
2.3.3.2 Ứng dụng thực tiễn 37
2.3.4 Tầm quan trọng của nuôi cấy mô thực vật 38
2.3.4.1 Ý nghĩa sinh học căn bản 38
2.3.4.2 Ý nghĩa thực tiễn . 38
2.3.5 Môi trường nuôi cấy mô tế bào thực vật 39
2.3.5.1 Nước . 39
2.3.5.2 Agar 39
2.3.5.3 Nguồn carbon 40
2.3.5.4 Chất khoáng 40
2.3.5.5 Vitamin . 41
2.3.5.6 Các chất điều hòa sinh trưởng . 41
2.3.5.7 Chất trích từ cây trồng . 42
2.3.5.8 Amino acid 42
2.3.5.9 Than hoạt tính . 42
2.3.6 Những vấn đề trong nhân giống in vitro 43
CHƯƠNG 3: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
3.1 THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM TIẾN HÀNH THÍ NGHIỆM 44
3.1.1 Địa điểm . 44
3.1.2 Thời gian 44
3.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU . 44
3.3 VẬT LIỆU THÍ NGHIỆM 44
3.3.1 Mẫu cấy mô thực vật 44
3.3.2 Mẫu Oligochitosan . 46
3.3.3 Dụng cụ thí nghiệm 46
3.3.4 Môi trường nuôi cấy mô thực vật . 46
3.4 ĐIỀU KIỆN THÍ NGHIỆM 47
3.5 PHƯƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM 47
3.5.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát khả năng tạo chồi trên môi trường MS bổ sung OligoChitosan có Mw ~ 3,5 kDa ở các nồng độ khác nhau trong nuôi cấy in vitro lan Dendrobium 47
3.5.2 Thí nghiệm 3: Khảo sát khả năng tạo chồi trên môi trường KC bổ sung OligoChitosan có Mw ~ 3,5 kDa ở các nồng độ khác nhau trong nuôi cấy in vitro lan Dendrobium 48
3.5.3 Thí nghiệm 2: Khảo sát khả năng tạo chồi trên môi trường MS bổ sung OligoChitosan có Mw ~ 7,5 ở các nồng độ khác nhau trong nuôi cấy in vitro lan Dendrobium . 49
3.5.4 Thí nghiệm 4: Khảo sát khả năng tạo chồi trên môi trường KC bổ sung OligoChitosan có Mw ~ 7,5 kDa ở các nồng độ khác nhau trong nuôi cấy in vitro lan Dendrobium 50
3.6 XỬ LÝ THỐNG KÊ 52
CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.1 Ảnh hưởng của Oligochitosan có khối lượng phân tử 3,5 KDa được bổ sung vào môi trường MS lên khả năng tạo chồi ở các nồng độ khác nhau trong nuôi cấy in vitro lan Dendrobium . 53
4.2 Ảnh hưởng của Oligochitosan có khối lượng phân tử 3,5 KDa được bổ sung vào môi trường KC lên khả năng tạo chồi ở các nồng độ khác nhau trong nuôi cấy in vitro lan Dendrobium . 59
4.3 So sánh hiệu ứng kích của Oligochitosan có cùng khối lượng phân tử Mw ~3,5 KDa lên khả năng tạo chồi trên hai môi trường khác nhau 64
4.4 So sánh hiệu ứng kích thích chiều cao chồi của hai loại môi trường MS và KC khi bổ sung Oligochitosan (Mw~3,5) vào môi trường nuôi cấy in vitro lan Dendrobium . 65
4.5 Ảnh hưởng của Oligochitosan có khối lượng phân tử 7,5 KDa được bổ sung vào môi trường MS lên khả năng tạo chồi ở các nồng độ khác nhau trong nuôi cấy in vitro lan Dendrobium . 67
4.6 Ảnh hưởng của Oligochitosan có khối lượng phân tử 7,5 KDa được bổ sung vào môi trường KC lên khả năng tạo chồi ở các nồng độ khác nhau trong nuôi cấy in vitro lan Dendrobium . 72
4.7 So sánh hiệu ứng kích của Oligochitosan có cùng khối lượng phân tử Mw ~7,5 KDa lên khả năng tạo chồi trên hai môi trường khác nhau 77
4.8 So sánh hiệu ứng kích thích chiều cao chồi của hai loại môi trường MS và KC khi bổ sung Oligochitosan (Mw~7,5) vào môi trường nuôi cấy in vitro lan Dendrobium . 78
Chương 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
5.1 KẾT LUẬN . 79
5.2 KIẾN NGHỊ 79
TÀI LIỆU THAM KHẢO 81
PHỤ LỤC 84
GIỚI THIỆU
1.1 ĐẶT VẤN ĐỀ:
Trong những năm gần đây với chính sách mở rộng đầu tư về mọi mặt của Nhà nước, đời sống vật chất và tinh thần của người dân ngày càng được cải thiện và nâng cao. Song song với nhu cầu về vật chất thì nhu cầu tinh thần đặc biệt không thể thiếu được. Từ lâu con người đã thích trồng hoa, cây cảnh vừa để trang trí cho đẹp, vừa để giải trí tinh thần. Mỗi người thích trồng một loài hoa khác nhau, việc lựa chọn loài hoa nào thường tuỳ thuộc vào điều kiện khí hậu của vùng đó, vẻ đẹp của hoa, cũng như là hoa đó có dễ trồng và chăm sóc hay không.
Hoa lan được nhiều người ưa thích, bởi lẽ hoa lan có cấu trúc kiêu kì và phức tạp, nhất là bộ phận môi có những nét chạm trổ rất tinh vi, lại rất phù hợp với điều kiện khí hậu của Việt Nam, dễ chăm sóc và mỗi người có thể chọn loại hoa lan mình thích tuỳ theo túi tiền của mình mà vẫn thoả mãn được thú vui tao nhã. Phong lan ở nước ta rất phong phú và đa dạng, có nhiều giống khác nhau như: Cattleya, Phalaenopsis, Oncidium, Mokara, Vanda, Dendrobium chúng đều cho hoa rất đẹp và mang nhiều màu sắc khác nhau. Nó có thể dùng để trang trí, trưng bày, làm đẹp, dùng trong các buổi lễ hay người ta có thể bán hoa cắt cành - kinh doanh. Trong số đó có lẽ Dendrobium là giống đặc sắc nhất từ màu sắc, dạng hoa cho đến giống loài. Mặt khác, Dendrobium cũng rất dễ trồng, rất siêng hoa và lâu tàn. Do đó nó rất được ưa chuộng và được trồng phổ biến nhất nước ta hiện nay nhằm phục vụ cho nhu cầu cuộc sống.
Ngày nay, việc nhân giống cây trồng in vitro đã không còn xa lạ nữa. Với những đóng góp vào nhiều thành tựu to lớn trong lĩnh vực nhân giống cây trồng, có thể nói đây là phương pháp tốt nhất và hiệu quả nhất hiện nay để nhân giống thực vật. Bằng phương pháp này chúng ta có thể tạo ra nhiều cây giống với thời gian rất ngắn, trong đó đa phần các giống lan thương phẩm đều được nhân giống bằng phương pháp nuôi cấy mô. Trước đây, người ta thường dùng môi trường dinh dưỡng có bổ sung các chất điều hòa sinh trưởng để nuôi cấy in vitro tế bào thực vật. Tuy nhiên, hiện nay các chất điều hòa sinh trưởng này vẫn còn rất đắt tiền. Việc nghiên cứu bổ sung các chất mới vào môi trường nhằm làm tăng tính kích thích tăng trưởng, giảm thời gian nuôi cấy và giảm chi phí nuôi cấy mô cũng là một vấn đề đáng quan tâm.
Từ lâu Oligosacharide nói chung và Oligochitosan nói riêng được biết đến bởi rất nhiều ứng dụng trong nhiều lĩnh vực khác nhau như nông nghiệp, lâm nghiệp, y học . Một trong những ứng dụng được nghiên cứu gần đây là khả năng kích thích sự sinh trưởng và phát triển mô thực vật. Nhiều nghiên cứu đã chứng minh Oligochitosan đóng vai trò như là một chất có khả năng kích thích sự hấp thu các chất dinh dưỡng của mô thực vật, đồng thời còn có tác dụng gia tăng hiệu ứng phytoalexin của mô cây giúp cho cây không chỉ tăng trưởng nhanh mà còn kháng lại một số loại bệnh do vi sinh vật gây nên. Hơn nữa, nguồn chế biến Oligochitosan hiện nay rất dễ tìm và rẻ tiền vì là sản phẩm phế liệu của ngành thủy sản.
Từ những vấn đề đã đặt ra, chúng tôi tiến hành thực hiện thử nghiệm đề tài: “Khảo sát khả năng thay thế chất điều hòa sinh trưởng của Oligochitosan trên hai môi trường Murashige & Skoog (MS) và Knudson C (KC) trong nuôi cấy in vitro lan Dendrobium thongchai gold”.
1.2 MỤC ĐÍCH
Nuôi cấy mô cây lan Dendrobium thongchai gold để tạo nguồn nguyên liệu phục vụ cho nghiên cứu và sản xuất.
Xác định ảnh hưởng của Oligochitosan trong nuôi cấy in vitro lan Dendrobium thongchai gold trên hai môi trường khác nhau.
1.3 YÊU CẦU
Xác định được nồng độ thích hợp của Oligochitosan được bổ sung vào môi
trường nuôi cấy có tác dụng kích thích sinh trưởng và phát triển của lan
Dendrobium thongchai gold trên hai môi trường Murashige và Skoog (MS) và
Knudson C (KC).