Luận Văn Khảo sát các điều kiện ban đầu để xây dựng quy trình nhân giống in vitro lan thủy tiên tím(dendrobiu

Sử dụng phương pháp RT–PCR thanh lọc được nguồn mẫu sạch, làm nguyên liệu ban đầu cho kỹthuật nhân giống in vitro cây lan Thủy tiên tím. Đoạn thân mang chồi bên được khử trùng bằng dung dịch Canxi Hypochlorideởcác nồng độkhác nhau và sử dụng các biện pháp bổ sung kháng sinh trong quá trình khử trùng và cô lập mẫu có kích thước nhỏ để hạn chế sự nhiễm do vi khuẩn nội sinh trong mẫu cấy. Sau đó, khảo sát sự ảnh hưởng của các loại chất điều hòa sinh trưởng BA (0, 2, 2.5 và3 mg/l) riêng lẻ và BA (2.5, 3, 4 mg/l) kết hợp với NAA 0.5 mg/llên khả năng tăng trưởng của chồi bên. Cuối cùng, sử dụng kỹ thuật RT –PCR để kiểm tra tình trạng sạch virus đối với những chồi lan in vitro vừa tái sinh sau 8 tuần nuôi cấy.
Kết quảđã chọn lọc được mẫucâylan Thủy tiên tím sạch virus từ bộ sưu tập để sử dụng làm nguyên liệu ban đầu choquy trình nhân giống in vitro. Xác đinh được nồng độ Ca(OCl)2 17%, thời gian khử trùng 30 phút kết hợp ngâm kháng sinh Streptomycin trong 20 phútcó khả năng khử trùng tốt nhất và tỷ lệ mẫu chết ít nhất. Tiếp theo, thành công trong việc tăng trưởng chồi bên trên môi trường MS bổ sung BA 3 hay4 mg/l kết hợpNAA0.5 mg/l. Sau 8 tuần các chồi tái sinh được kiểm tra lại bằng phương pháp RT–PCR khẳng định hoàn toàn sạch virus.
-------------------------------------------
MỤC LỤC


LỜI CẢM ƠN
TÓM TẮT
MỤC LỤC
CÁC TỪVIẾT TẮT
DANH MỤC BẢNG
DANH MỤC HÌNH
Chương 1: MỞ ĐẦU
1.1. Đặt vấn đề
1.2. Yêu cầu đề tài
1.3. Nội dung thực hiện
CHƯƠNG 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU
2.1. Sơ lược về giống lan Dendrobium
2.1.1 Phân loại
2.1.2 Phân bố
2.1.3 Đặc điểm hình thái
2.1.4 Đặc điểm sinh thái
2.2. Sơ lược về lan Thủy tiên tím (Dendrobium amabile)
2.2.1 Đặc điểm hình thái
2.2.2 Đặc điểm sinh thái
2.2.3 Các yếu tốmôi trường ảnh hưởng sựphát triển của thủy tiên tím.
2.3. Giới thiệu tổng quan vềvirus
2.3.1 Cách gọi tên virus
2.3.2 Thành phần cấu tạo
2.3.3 Phương thức sinh sản và lan truyền
2.4. Sơ lược về virus thực vật
2.5. Sơ lược về virus gây bệnh trên lan
2.5.1 Cymbidium mosaic virus (CyMV)
2.5.2 Odontoglossum ringspot virus (ORSV)
2.6. Sơ lược về phương pháp RT-PCR
2.7. Sơ lược về kỹ thuật nuôi cấy mô
2.7.1 Vài nét về kỹ thuật nuôi cấy mô
2.7.2 Các giai đoạn của nhân giống in vitro
2.7.3 Những thuận lợi và khó khăn của kỹ thuật nhân giống in vitro
2.7.4 Một số phương pháp nuôi cấy mô tạo cây hoàn chỉnh
2.7.5 Sơ lược về những kết quả nghiên cứu nhân giống in vitro trên giống Dendrobium
CHƯƠNG 3: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.1. Vật liệu
3.1. 1.Mẫu thí nghiệm
3.1. 2.Địa điểm và thời gian thực hiện
3.1. 3.Thiết bị dụng cụ dùng trong phòng thí nghiệm
3.1. 4. Các hóa chất sử dụng trong thí nghiệm
3.2. Phương pháp
3.2. 1 Thanh lọc nguồn mẫu sạch virus bằng phương pháp RT–PCR
3.2. 2 Khử trùng mẫu tạo nguồn mẫu ban đầu cho nhân giống in vitro
3.2. 3 Khảo sát ảnh hưởng của BA và NAA lên sự tăng trưởng chồi bên lấy từ đoạn thân Thủy tiên tím
3.2. 4 Kiểm tra sự nhiễm virus của mẫu sau khi nuôi cấy
CHƯƠNG4: KẾT QUẢ VÀTHẢO LUẬN
4.1. Thanh lọc nguồn mẫu sạch virus bằng phương pháp RT–PCR
4.2. Khử trùng mẫu tạo nguồn vật liệu ban đầu
4.3. Ảnh hưởng của chất điều hòa sinh trưởng BA lên sựtăng trưởng chồi bên cô lập từ
thân lan Thủy tiên tím
4.4. Ảnh hưởng của BA và NAA lên sự tăng trưởng chồi bên cô lập từ thân lan Thủy tiên tím
4.5. Kiểm tra sự nhiễm virus của mẫu sau khi nuôi cấy
CHƯƠNG5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ
5.1. Kết luận
5.2. Đề nghị
TÀI LIỆU THAM KHẢO
PHỤ LỤC
---------------------------------------------------
GVHD:
ThS.NGUYỄN XUÂN DŨNG
KS.NGUYỄN PHÚC TRƯỜNG
TT CÔNG NGHỆ SINH HỌC TP.HCM