Đồ Án đồ án dùng vi khuẩn chuyển gen tạo quýt không hạt

[HR][/HR]MỤC LỤC

MỤC LỤC . i
DANH MỤC BẢNG iii
DANH MỤC HÌNH . iv
DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT . v
TÓM TẮT . vi
Phần 1. MỞ ĐẦU 1
1.1 Đặt vấn đề . 1
1.2. Mục đích, yêu cầu 2
1.2.1. Mục đích . 2
1.2.2. Yêu cầu . 2
Phần 2. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3
2.1. Giới thiệu chung về cây quýt 3
2.2. Giới thiệu chung về công nghệ chuyển gen ở thực vật . 4
2.2.1. Các phương pháp chuyển gen . 4
2.2.2. Phương pháp chuyển gen gián tiếp nhờ vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens . 5
2.2.3. Các phương pháp đánh giá cây chuyển gen . 7
2.3. Các nghiên cứu trong nước và trên thế giới tạo quả không hạt. . 9
2.3.1. Các nghiên cứu tạo quả không hạt trên thế giới 9
2.3.2. Các nghiên cứu trong nước . 14
2.4. Các nghiên cứu chuyển gen ở cây cam quýt bằng vi khuẩn A. tumefaciens . 15
Phần 3. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP . 19
3.1. Vật liệu 19
3.2. Phương pháp 20
3.3. Nội dung nghiên cứu . 23
3.4. Các chỉ tiêu theo dõi và xử lý số liệu 24
Phần 4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 25
4.1. Ảnh hưởng của thời gian lây nhiễm đến hiệu quả biến nạp của vi khuẩn. . 25
4.2. Ảnh hưởng của thời gian đồng nuôi cấy đến khả năng chuyển gen của vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens 31
4.3. Ảnh hưởng của Acetosyringone (AS) đến sự biến nạp của vi khuẩn . 37
4.4. Ảnh hưởng của môi trường đồng nuôi cấy đến khả năng tái sinh chồi . 40
4.5. Ảnh hưởng của môi trường tái sinh đến khả năng tái sinh và hiệu quả chuyển gen 44
Phần 5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ . 49
5.1.Kết luận . 49
5.2. Đề nghị . 50
TÀI LIỆU THAM KHẢO . i
PHỤ LỤC i



DANH MỤC BẢNG

Bảng 1 . Ảnh hưởng của thời gian lây nhiễm đến tỷ lệ mọc khuẩn trong thời gian đồng nuôi cấy. 25
Bảng 2 . Tỷ lệ mẫu sống sau rửa khuẩn 27
Bảng 3 . Ảnh hưởng của thời gian lây nhiễm đến sự tái sinh chồi và hiệu quả chuyển gen. . 28
Bảng 4 . Tỷ lệ mọc khuẩn trong thời gian đồng nuôi cấy . 31
Bảng 5 . Tỷ lệ mẫu sống sau hai lần rửa khuẩn . 33
Bảng 6 . Ảnh hưởng của thời gian đồng nuôi cấy đến hiệu quả tái sinh chồi và hiệu quả chuyển gen của vi khuẩn 34
Bảng 7 . Ảnh hưởng của nồng độ AS đến tái sinh chồi và hiệu quả chuyển gen. . 36
Bảng 8 . Ảnh hưởng của môi trường đồng nuôi cấy đến khả năng tái sinh và hiệu quả biến nạp của vi khuẩn. 38
Bảng 9 . Ảnh hưởng của BAP và IAA đến khả năng tái sinh chồi ở quýt Đường canh 43






DANH MỤC HÌNH

Hình 1 Cơ chế chuyển gen của vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens . 7
Hình 2 Phản ứng sinh màu của hóa chất X-gluc 9
Hình 3 Chiến lược tạo quả không hạt . 12
Hình 4 Sơ đồ sinh và mẫn cảm auxin/GA ở bầu nhụy 13
Hình 5 Cây con 3 tuần tuổi 19
Hình 6 Cấu trúc vector pDU04.4522 19
Hình 7 Sơ đồ quá trình thực hiện đề tài. . 20
Hình 8 Ảnh mẫu cấy trong môi trường đồng nuôi cấy khi lây nhiễm ở các thời gian khác nhau 26
Hình 7 Chồi tái sinh ở các thời gian lây nhiễm khác nhau . 30
Hình 8 Vi khuẩn mọc trong thời gian đồng nuôi cấy . 32
Hình 9 Chồi tái sinh khi đồng nuôi cấy ở các môi trường khác nhau 40
Hình 10 Hình ảnh kết quả nhuộm gen gus 41
Hình 11 Chồi tái sinh trên môi trường có nồng độ BAP và IAA khác nhau. 45








DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT

BA: 6-Benzyl Adenine
BAP: 6-Benzyl Adenopurine
IAA: indol-3-acetic acid
2-ip: 2-isopentenyl-adenine
NAA: Napthaleneacetic acid
2,4-D: 2,4-dichlorophenoxyacetic acid
Ki: Kinetin
MS: Murashige and Skoog, 1962
LB: Luria-Bertani medium
AS: Acetosyringone
CT: Công thức
ĐC: Đối chứng
X-gluc: 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-glucuronide