Luận Văn Đánh giá tình trang nhiễm cucumber mosaic virus, tobacco mosaic virus, tomato stotted will virus trê

MỤC LỤC

PHẦN TRANG

Trang tựa

Lời cảm tạ .iii

Tóm tắt iv

Mục lục v

Danh sách các chữ viết tắt x

Danh sách các hình .xi

Danh sách các bảng xii

Danh sách các biểu đồ .xiii

1. MỞ ĐẦU .1

1.1 Đặt vấn đề 1

1.2 Mục đích – Yêu cầu .2

1.2.1 Mục đích .2

1.2.2 Yêu cầu .2

2. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3

2.1 Giới thiệu về cây thuốc lá 3

2.1.1 Vị trí phân loại 3

2.1.2 Nguồn gốc và phân bố 3

2.1.3 Đặc điểm di truyền .3

2.1.4 Đặc điểm hình thái 3

2.1.5 Đặc điểm trồng trọt .4

2.1.5.1 Yếu tố khí hậu 4

2.1.5.2 Yếu tố đất đai 4

2.1.5.3 Yếu tố sinh vật 4

2.1.6 Giá trị luận văn kinh tế" onclick="replacer_hook(2)" target="_blank" href="http://www.mautailieu.com/m7/">kinh tế và sử dụng .4

2.2 Giới thiệu về cây đậu phộng 7

2.2.1 Vị trí phân loại 7

2.2.2 Nguồn gốc và phân bố 7

2.2.3 Đặc điểm di truyền .7

2.2.4 Đặc điểm hình thái 8

2.2.5 Đặc điểm trồng trọt .8

2.2.5.1 Yếu tố khí hậu 8

2.2.5.2 Yếu tố đất đai 8

2.2.5.3 Yếu tố sinh vật 8

2.2.6 Giá trị kinh tế và sử dụng .9

2.3 Một số bệnh trên thực vật do virus gây ra . 11

2.3.1 Sơ lược chung về virus gây hại thực vật 11

2.3.1.1 Đặc điểm chung 11

2.3.1.2 Sự lan truyền bệnh virus thực vật . 11

2.3.2 Một số bệnh do các virus khác gây hại trên cây thuốc lá . 12

2.3.3 Một số bệnh do các virus khác gây hại trên cây đậu phộng . 13

2.4 Giới thiệu về Tomato Spotted Wilt Virus 14

2.4.1 Nguồn gốc và sự lan truyền của TSWV . 15

2.4.2 Cấu trúc của virus TSWV . 15

2.4.3 Phân loại TSWV . 15

2.4.4 Dãy ký chủ của TSWV . 16

2.4.5 Con đường truyền bệnh 16

2.4.6 Điều kiện phát triển bệnh 17

2.4.7 Triệu chứng bệnh trên cây nhiễm TSWV . 17

2.4.8 Khống chế bệnh do TSWV .20

2.5 Giới thiệu về Tobacco Mosaic Virus .20

2.5.1 Nguồn gốc của TMV 20

2.5.2 Cấu trúc của virus TMV .21

2.5.3 Phân loại TMV .21

2.5.4 Dãy ký chủ của TMV .21

2.5.5 Con đường truyền bệnh 21

2.5.6 Điều kiện phát triển bệnh 22

2.5.7 Triệu chứng bệnh trên cây nhiễm TMV .22

2.5.8 Khống chế bệnh do TMV .24

2.6 Giới thiệu về Cucumber Mosaic Virus 24

2.6.1 Nguồn gốc của CMV 24

2.6.2 Cấu trúc của virus CMV .24

2.6.3 Phân loại CMV .24

2.6.4 Dãy ký chủ của CMV .25

2.6.5 Con đường truyền bệnh 25

2.6.6 Điều kiện phát triển bệnh 26

2.6.7 Triệu chứng bệnh trên cây nhiễm CMV .27

2.6.8 Khống chế bệnh do CMV .27

2.7 Phương pháp chẩn đoán bệnh do virus gây ra .29

2.7.1 Phương pháp chẩn đoán bằng kính hiển vi điện tử 29

2.7.2 Phương pháp chẩn đoán bằng cây chỉ thị .29

2.7.3 Phương pháp chẩn đoán dựa vào triệu chứng .29

2.8 ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) 30

2.8.1 Nguyên lý ELISA .30

2.8.2 Phân loại ELISA .30

2.8.2.1 ELISA trực tiếp 30

2.8.2.2 ELISA gián tiếp 30

2.8.2.3 Sandwich ELISA 31

2.8.3 Các yếu tố ảnh hưởng trong phản ứng ELISA .31

2.8.4 Các yếu tố ảnh hưởng đến kết quả phản ứng ELISA .31

2.9 PCR (Polymerase Chain Reaction) 31

2.9.1 Nguyên tắc 31

2.9.2 Ưu nhược điểm của phản ứng PCR 33

2.10 RT – PCR (Reverse Transcriptase – Polymerase Chain Reaction) .34

2.10.1 Nguyên tắc 34

2.10.2 Phương pháp thực hiện trong phản ứng tổng hợp cDNA .34

2.11 Một số kỹ thuật PCR khác .35

2.11.1 Kỹ thuật PCR đảo .35

2.11.2 Kỹ thuật NESTED – PCR 35

2.11.3 Kỹ thuật RACE (Rapia Amplification of cDNA Ends) .35

2.12 Những nghiên cứu trong và ngoài nước bệnh do TMV, CMV, TSWV

gây ra .36

2.13.1 Những nghiên cứu trên thế giới 36

2.13.2 Những nghiên cứu tại Việt Nam .36

3. VẬT LIỆU VÀ PHưƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .37

3.1 Thời gian và địa điểm nghiên cứu .37

3.2 Phương pháp lấy mẫu .37

3.3 Dụng cụ 37

3.4 Phương pháp chẩn đoán TMV, CMV và TSWV bằng dDAS – ELISA .38

3.4.1 Hóa chất 38

3.4.2 Phương pháp thực hiện .38

3.4.2.1 Ly trích mẫu .38

3.4.2.2 Thực hiện phản ứng ELISA 38

3.5 Phương pháp chẩn đoán TMV bằng RT – PCR 40

3.5.1 Hóa chất 40

3.5.2 Phương pháp thực hiện .41

3.5.2.1 Ly trích RNA 41

3.5.2.2 Khuếch đại bằng RT – PCR .42

3.5.2.3 Đổ gel điện di .43

4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .45

4.1 Chẩn đoán bằng kỹ thuật ELISA .45

4.1.1 Tỷ lệ nhiễm TSWV trên đậu phộng tại huyện Dương Minh Châu

và Bến Cầu 45

4.1.2 Tỷ lệ nhiễm CMV, TMV và TSWV trên thuốc lá thu thập tại

huyện Tân Biên và Bến Cầu .46

4.1.3 Tỷ lệ nhiễm CMV trên thuốc lá tại huyện Tân Biên và Bến Cầu 47

4.1.4 Tỷ lệ nhiễm TMV trên thuốc lá tại huyện Tân Biên và Bến Cầu .48

4.1.5 Tỷ lệ chỉ nhiễm CMV hay chỉ nhiễm TMV hay nhiễm hỗn hợp

CMV và TMV trên số mẫu thu thập được 50

4.1.6 Tỷ lệ bệnh theo triệu chứng quan sát được trên cây thuốc lá .51

4.2 Kết quả RT – PCR .55

5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ .59

6. TÀI LIỆU THAM KHẢO .60

7. PHỤ LỤC 63 .