Luận Văn Đánh giá tình trang nhiễm cucumber mosaic virus, tobacco mosaic virus, tomato stotted will virus trê

TÓM TẮT


Đánh giá tình trang nhiễm cucumber mosaic virus, tobacco mosaic virus, tomato stotted will virus trên cây thuốc lá (nicotiana tabacuml) và cây đậu phộng (arachis hypogaeal) tại tỉnh Tây Ninh và chẩn đoán tobacco mosaic vius bằng kỹ thuật RT-PCR


Đề tài được thực hiện tại các huyện Tân Biên, huyện Bến Cầu, huyện Dương Minh


Châu của tỉnh Tây Ninh và Trung tâm Phân tích Thí nghiệm Hóa Sinh trường Đại học


Nông lâm TP. Hồ Chí Minh, từ tháng 03/ 2006 đến tháng 08/ 2006.


Nội dung tiến hành:


Tìm hiểu mức độ nhiễm TMV, CMV và TSWV trên cây thuốc lá và đậu


phộng tại tỉnh Tây Ninh.


Thu thập mẫu có triệu chứng nhiễm bệnh tại địa bàn điều tra.


Tiến hành chẩn đoán bằng kỹ thuật ELISA nhằm xác định mẫu dương tính với


TMV, CMV và TSWV.


Chọn mẫu dương tính với TMV thực hiện RT – PCR, với mục đích xây dựng


quy trình RT – PCR chẩn đoán TMV, nhằm khẳng định lại kết quả ELISA.


Kết quả thu được:


Chưa phát hiện được TSWV trên thuốc lá và đậu phộng tại các huyện thu thập


mẫu ở tỉnh Tây Ninh.


Thuốc lá tại Tây Ninh nhiễm TMV với tỷ lệ khá cao (69,1%). Trong đó,


huyện Tân Biên nhiễm TMV là chủ yếu (69,2%) và ở Bến Cầu là CMV (60,6%).


Kỹ thuật RT – PCR bước đầu đã khuếch đại được đoạn gen đặc trưng của


TMV với kích thước 1000 bp. Điều này đã cho thấy rằng dòng TMV gây bệnh


trên thuốc lá tại Việt Nam đã biến đổi so với các dòng virus khác.


MỤC LỤC


PHẦN TRANG


Trang tựa


Lời cảm tạ .iii


Tóm tắt iv


Mục lục v


Danh sách các chữ viết tắt x


Danh sách các hình .xi


Danh sách các bảng xii


Danh sách các biểu đồ .xiii


1. MỞ ĐẦU .1


1.1 Đặt vấn đề 1


1.2 Mục đích – Yêu cầu .2


1.2.1 Mục đích .2


1.2.2 Yêu cầu .2


2. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3


2.1 Giới thiệu về cây thuốc lá 3


2.1.1 Vị trí phân loại 3


2.1.2 Nguồn gốc và phân bố 3


2.1.3 Đặc điểm di truyền .3


2.1.4 Đặc điểm hình thái 3


2.1.5 Đặc điểm trồng trọt .4


2.1.5.1 Yếu tố khí hậu 4


2.1.5.2 Yếu tố đất đai 4


2.1.5.3 Yếu tố sinh vật 4


2.1.6 Giá trị kinh tế và sử dụng .4


2.2 Giới thiệu về cây đậu phộng 7


2.2.1 Vị trí phân loại 7


2.2.2 Nguồn gốc và phân bố 7


2.2.3 Đặc điểm di truyền .7


2.2.4 Đặc điểm hình thái 8


2.2.5 Đặc điểm trồng trọt .8


2.2.5.1 Yếu tố khí hậu 8


2.2.5.2 Yếu tố đất đai 8


2.2.5.3 Yếu tố sinh vật 8


2.2.6 Giá trị kinh tế và sử dụng .9


2.3 Một số bệnh trên thực vật do virus gây ra . 11


2.3.1 Sơ lược chung về virus gây hại thực vật 11


2.3.1.1 Đặc điểm chung 11


2.3.1.2 Sự lan truyền bệnh virus thực vật . 11


2.3.2 Một số bệnh do các virus khác gây hại trên cây thuốc lá . 12


2.3.3 Một số bệnh do các virus khác gây hại trên cây đậu phộng . 13


2.4 Giới thiệu về Tomato Spotted Wilt Virus 14


2.4.1 Nguồn gốc và sự lan truyền của TSWV . 15


2.4.2 Cấu trúc của virus TSWV . 15


2.4.3 Phân loại TSWV . 15


2.4.4 Dãy ký chủ của TSWV . 16


2.4.5 Con đường truyền bệnh 16


2.4.6 Điều kiện phát triển bệnh 17


2.4.7 Triệu chứng bệnh trên cây nhiễm TSWV . 17


2.4.8 Khống chế bệnh do TSWV .20


2.5 Giới thiệu về Tobacco Mosaic Virus .20


2.5.1 Nguồn gốc của TMV 20


2.5.2 Cấu trúc của virus TMV .21


2.5.3 Phân loại TMV .21


2.5.4 Dãy ký chủ của TMV .21


2.5.5 Con đường truyền bệnh 21


2.5.6 Điều kiện phát triển bệnh 22


2.5.7 Triệu chứng bệnh trên cây nhiễm TMV .22


2.5.8 Khống chế bệnh do TMV .24


2.6 Giới thiệu về Cucumber Mosaic Virus 24


2.6.1 Nguồn gốc của CMV 24


2.6.2 Cấu trúc của virus CMV .24


2.6.3 Phân loại CMV .24


2.6.4 Dãy ký chủ của CMV .25


2.6.5 Con đường truyền bệnh 25


2.6.6 Điều kiện phát triển bệnh 26


2.6.7 Triệu chứng bệnh trên cây nhiễm CMV .27


2.6.8 Khống chế bệnh do CMV .27


2.7 Phương pháp chẩn đoán bệnh do virus gây ra .29


2.7.1 Phương pháp chẩn đoán bằng kính hiển vi điện tử 29


2.7.2 Phương pháp chẩn đoán bằng cây chỉ thị .29


2.7.3 Phương pháp chẩn đoán dựa vào triệu chứng .29


2.8 ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) 30


2.8.1 Nguyên lý ELISA .30


2.8.2 Phân loại ELISA .30


2.8.2.1 ELISA trực tiếp 30


2.8.2.2 ELISA gián tiếp 30


2.8.2.3 Sandwich ELISA 31


2.8.3 Các yếu tố ảnh hưởng trong phản ứng ELISA .31


2.8.4 Các yếu tố ảnh hưởng đến kết quả phản ứng ELISA .31


2.9 PCR (Polymerase Chain Reaction) 31


2.9.1 Nguyên tắc 31


2.9.2 Ưu nhược điểm của phản ứng PCR 33


2.10 RT – PCR (Reverse Transcriptase – Polymerase Chain Reaction) .34


2.10.1 Nguyên tắc 34


2.10.2 Phương pháp thực hiện trong phản ứng tổng hợp cDNA .34


2.11 Một số kỹ thuật PCR khác .35


2.11.1 Kỹ thuật PCR đảo .35


2.11.2 Kỹ thuật NESTED – PCR 35


2.11.3 Kỹ thuật RACE (Rapia Amplification of cDNA Ends) .35


2.12 Những nghiên cứu trong và ngoài nước bệnh do TMV, CMV, TSWV


gây ra .36


2.13.1 Những nghiên cứu trên thế giới 36


2.13.2 Những nghiên cứu tại Việt Nam .36


3. VẬT LIỆU VÀ PHưƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .37


3.1 Thời gian và địa điểm nghiên cứu .37


3.2 Phương pháp lấy mẫu .37


3.3 Dụng cụ 37


3.4 Phương pháp chẩn đoán TMV, CMV và TSWV bằng dDAS – ELISA .38


3.4.1 Hóa chất 38


3.4.2 Phương pháp thực hiện .38


3.4.2.1 Ly trích mẫu .38


3.4.2.2 Thực hiện phản ứng ELISA 38


3.5 Phương pháp chẩn đoán TMV bằng RT – PCR 40


3.5.1 Hóa chất 40


3.5.2 Phương pháp thực hiện .41


3.5.2.1 Ly trích RNA 41


3.5.2.2 Khuếch đại bằng RT – PCR .42


3.5.2.3 Đổ gel điện di .43


4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .45


4.1 Chẩn đoán bằng kỹ thuật ELISA .45


4.1.1 Tỷ lệ nhiễm TSWV trên đậu phộng tại huyện Dương Minh Châu


và Bến Cầu 45


4.1.2 Tỷ lệ nhiễm CMV, TMV và TSWV trên thuốc lá thu thập tại


huyện Tân Biên và Bến Cầu .46


4.1.3 Tỷ lệ nhiễm CMV trên thuốc lá tại huyện Tân Biên và Bến Cầu 47


4.1.4 Tỷ lệ nhiễm TMV trên thuốc lá tại huyện Tân Biên và Bến Cầu .48


4.1.5 Tỷ lệ chỉ nhiễm CMV hay chỉ nhiễm TMV hay nhiễm hỗn hợp


CMV và TMV trên số mẫu thu thập được 50


4.1.6 Tỷ lệ bệnh theo triệu chứng quan sát được trên cây thuốc lá .51


4.2 Kết quả RT – PCR .55


5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ .59


6. TÀI LIỆU THAM KHẢO .60


7. PHỤ LỤC 63