Báo Cáo Đánh giá khả năng đáp ứng miễn dịch đối với Protein MBP-VT2eB trên heo

1. MỞ ĐẦU . 1
1.1. ĐẶT VẤN ĐỀ 1
1.2 MỤC TIÊU VÀ YÊU CẦU 1
2.TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2

2.1 VACXIN 2
2.1.1 Lịch sử ra đời vacxin 2
2.1.2 Đáp ứng miễn dịch . 2
2.1.2.1Kháng nguyên . 2
2.1.2.2 Kháng thể 3
2.1.2.3 Cơ chế đáp ứng miễn dịch . 4
2.1.2.4 Các yếu tố ảnh hưởng đến đáp ứng miễn dịch 7
2.1.3 Phân loại . 9
2.1.3.1 Vacxin sống . 9
2.1.2.2 Vacxin vô hoạt 10
2.1.2.3 Vacxin phân tử 10
2.2 BỆNH PHÙ VÀ ĐỘC TỐ VT2e . 12
2.2 PROTEIN TÁI TỔ HỢP MBP-VT2eB . 14
2.3 PHƯƠNG PHÁP OUCHTERLONY 14
2.3.1 Nguyên tắc . 14
2.3.2 Định tính kháng nguyên- kháng thể bằng phương pháp khuyếch tán trên
thạch . 16
2.4 PHẢN ỨNG TRUNG HÒA ĐỘC TỐ VEROTOXIN TRÊN TẾ BÀO
VERO . 16
2.4.1 Sơ lược về tế bào Vero 16
2.4.2 Nguyên tắc phản ứng trung hòa độc tố 17
2.4.3 Đánh giá hiệu quả vacxin bệnh phù bằng phương pháp trung hoà độc
tố verotoxin trên môi trường nuôi cấy tế bào vero . 17
3. NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP TIẾN HÀNH . 18

3.1 THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM 18
3.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU . 18
3.3 VẬT LIỆU THÍ NGHIỆM 18
3.3.1 Sinh vật thí nghiệm 18
3.3.2 Hóa chất thí nghiệm . 18
3.3.3 Dụng cụ thí nghiệm 19
3.4 PHƯƠNG PHÁP . 20
3.4.1 Bố trí thí nghiệm . 20
3.4.2 Cách pha dịch tiêm . 20
3.4.3 Lấy máu . 20
3.4.4 Định tính kháng thể bằng phương pháp Ouchterlony . 21
3.4.5 Xác định liều TCID50 22
3.4.5.1Chuẩn bị dịch độc tố 22
3.4.5.2Chuẩn bị tế bào vero 22
3.4.5.3Xác định liều TCID50 23
3.4.6 Thực hiện phản ứng trung hòa độc tố 25
3.5 Các chỉ tiêu theo dõi . 26
4.KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 27
4.1 CÁC TRIỆU CHỨNG CỦA HEO SAU KHI TIÊM VACXIN . 27
4.2 HIỆU GIÁ KHÁNG HUYẾT THANH THEO PHƯƠNG PHÁP KẾT TỦA KHUYẾCH TÁN TRÊN THẠCH 27
4.2.1 Với kháng nguyên là độc tố của E. coli H28 27
4.2.2 Với kháng nguyên MBP-VT2eB . 28
4.3 LIỀU TCID50 CỦA DỊCH LỌC VI KHUẨN 27
4.4 HIỆU GIÁ KHÁNG HUYẾT THANH TRÊN MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY
TẾ BÀO . 30
4.4.1 Đối với mẫu huyết thanh có sodium azid chưa bất hoạt 30
4.4.2 Đối với mẫu huyết thanh có sodium azid và có bất hoạt . 31
4.4.3 Thí nghiệm chứng minh sodium azid gây chết tế bào vero . 33
4.4.3.1 Mẫu huyết thanh có sodium azid 33
4.4.3.1 Đối với mẫu không có sodium azid 33
4.4.4 Đối với mẫu huyết thanh không có sodium azid và có bất hoạt . 33
5.KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 36

5.1 KẾT LUẬN . 36
5.2 ĐỀ NGHỊ . 36
6.TÀI LIỆU THAM KHẢO . 38

7.PHỤ LỤC . 39

Thành phần hóa chất . 39
Bảng phân tích biến lượng tăng trọng heo thí nghiệm 41
Bảng 3. Kết quả đo OD620nm đối với mẫu có sodiumazid, có bất hoạt 42

Bảng 4. Kết quả đo OD620nm đối với mẫu không có sodiumazid, có bất hoạt 43