Thạc Sĩ Đặc điểm dịch tễ bệnh sán lá gan lớn ở trâu, bò tỉnh Quảng Ninh, biện pháp phòng và trị bệnh

MỤC LỤC Trang
Trang phụ bìa Lời cam đoan Mục lục
Danh mục các ký hiệu, các chữ viết tắt
Danh mục các bảng
Danh mục các hình
ĐẶT VẤN ĐỀ 1
Chương 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 4
1.1. UNG THƯ CỔ TỬ CUNG VÀ HUMAN PAPILLOMA VIRUS (HPV) 4
1.1.1 Dịch tễ học ung thư cổ tử cung . 4
1.1.1.1. Trên thế giới . 4
1.1.1.2. Tình hình ung thư cổ tử cung ở Việt Nam . 6
1.1.1.3. Các yếu tố có nguy cơ đối với ung thư CTC . 6
1.1.1.4. Human papilloma virus và bệnh ung thư cổ tử cung . 6
1.1.2. Phân loại và đặc tính sinh học của Papilloma virus 9
1.1.2.1. Phân loại Papilloma virus 9
1.1.2.2. Đặc tính sinh học của Human Papillomavirus 12
1.1.2.3. Quá trình nhân lên của HPV 14
1.1.2.4. Cơ chế gây ung thư cổ tử cung của HPV . 16
1.1.3. Chẩn đoán ung thư CTC 17
1.1.3.1. Chẩn đoán tế bào học . 17
1.1.3.2. Chẩn đoán dựa trên phân tích mRNA 19
1.1.3.3. Định týp HPV bằng sinh học phân tử 19


[TABLE]
[TR]
[TD]1.1.4. Tầm quan trọng của việc nghiên cứu sinh học phân tử và xây dựng
phương pháp PCR chẩn đoán nhanh HPV gây ung thư cổ tử cung ở Việt Nam .
[/TD]
[TD]

21
[/TD]
[/TR]
[TR]
[TD]1.2. UNG THƯ VÒM MŨI HỌNG VÀ EPSTEIN-BARR VIRUS (EBV) .
[/TD]
[TD]22
[/TD]
[/TR]
[TR]
[TD]1.2.1. Dịch tễ học ung thư vòm mũi họng .
[/TD]
[TD]
22
[/TD]
[/TR]
[TR]
[TD]1.2.1.1. Tình hình nghiên cứu trên thế giới
[/TD]
[TD]22
[/TD]
[/TR]
[TR]
[TD]1.2.1.2 Tình hình nghiên cứu tại Việt Nam
[/TD]
[TD]23
[/TD]
[/TR]
[/TABLE]
1.2.2. Đặc tính sinh học của Epstein-Bar virus (EBV) 24
1.2.2.1. Phát hiện virus Epstein - Barr và ung thư VMH . 24
1.2.2.2. Đặc điểm phân loại và cấu trúc EBV . 25
1.2.2.3. Sự nhân lên, tàng nhiễm và khả năng gây ung thư của
EBV 26
1.2.2.4. Sinh học phân tử và sắp xếp hệ gene của EBV 28
1.2.2.5. Gene và sản phẩm của gene EBNA-1 29
1.2.3. Tầm quan trọng của việc nghiên cứu sinh học phân tử và xây dựng phương pháp PCR chẩn đoán sớm EBV ung thư vòm mũi họng ở Việt Nam 30
CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU . 33
[TABLE]
[TR]
[TD]2.1. Đối tượng nghiên cứu
[/TD]
[TD]33
[/TD]
[/TR]
[TR]
[TD]2.2. Dụng cụ, trang thiết bị nghiên cứu và hoá chất nghiên cứu .
[/TD]
[TD]
33
[/TD]
[/TR]
[TR]
[TD]2.2.1. Dụng cụ, trang thiết bị .
[/TD]
[TD]
33
[/TD]
[/TR]
[TR]
[TD]2.2.2. Hoá chất .
[/TD]
[TD]
33
[/TD]
[/TR]
[TR]
[TD]2.3. Phương pháp nghiên cứu
[/TD]
[TD]
34
[/TD]
[/TR]
[/TABLE]
2.4. Quy trình nghiên cứu . 35
2.4.1. Lấy mẫu và bảo quản 35
2.4.2. Kỹ thuật tách chiết DNA tổng số . 35
2.4.3. Quy trình phản ứng PCR và kiểm tra sản phẩm PCR 37


2.4.3.1. Thiết kế mồi . 37
[TABLE]
[TR]
[TD]2.4.3.2. Quy trình phản ứng PCR .
[/TD]
[TD]38
[/TD]
[/TR]
[TR]
[TD]2.4.3.3. Kỹ thuật phát hiện sản phẩm PCR .
[/TD]
[TD]
40
[/TD]
[/TR]
[TR]
[TD]2.4.3.4. Tinh sạch sản phẩm PCR .
[/TD]
[TD]
41
[/TD]
[/TR]
[TR]
[TD]2.4.4. Phương pháp tạo dòng sản phẩm PCR
[/TD]
[TD]
42
[/TD]
[/TR]
[TR]
[TD]2.4.4.1. Tạo vectơ tái tổ hợp .
[/TD]
[TD]
42
[/TD]
[/TR]
[TR]
[TD]2.4.4.2. Chuyển nạp
[/TD]
[TD]
43
[/TD]
[/TR]
[/TABLE]
2.4.4.3. Chọn lọc vi khuẩn tái tổ hợp 44
2.4.4.4. Tách DNA plasmid tái tổ hợp 45
2.4.4.5. Kiểm tra DNA tái tổ hợp . 47
2.4.5. Giải trình trình tự và xử lý số liệu 48
CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 51
3.1. Kết quả thu nhận, giải trình trình tự và xác định gen E6 của HPV-16
và L1 của HPV-18 51
3.1.1. Kết quả kiểm tra DNA tổng số từ mẫu bệnh phẩm 51
3.1.2. Kết quả thực hiện phản ứng Multiplex-PCR phát hiện HPV-16 và
HPV-18 52
3.1.3. Kết quả tách dòng và giải trình tự các sản phẩm HPV-16 và
HPV-18 từ các mẫu kiểm tra 53
3.1.4. Kết quả giải trình tự và thu nhận chuỗi gen E6 của HPV-16 và
chuỗi gen L1 của HPV-18 . 54
3.1.5. Kết quả truy cập Ngân hàng gen xác định chuỗi gen E6 của
HPV16 và L1 của HPV18 . 56
3.1.6. Kết quả bước đầu phát hiện HPV-16 và HPV-18 bằng phương
pháp đa mồi multiplex-PCR 59


3.2. Kết quả thu nhận, giải trình trình tự và xác định gen EBNA – 1 của
EBV 60
3.2.1. Kết quả kiểm tra DNA tổng số từ mẫu bệnh phẩm 60
3.2.2. Kết quả thực hiện phản ứng PCR 61
3.2.3. Kết quả giải trình tự và thu nhận chuỗi gen EBNA-1 của EBV 62
3.2.4. Kết quả truy cập Ngân hàng gen xác định chuỗi gen EBNA-1
của EBV . 63
3.2.5. Kết quả xác định phân týp EBV qua phân tích vị trí acid amin
số 487 của EBNA-1 thu nhận với chuỗi gen tương ứng của các chủng Việt
Nam và thế giới . 64
CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ . 69
4.1. KẾT LUẬN 69
4.2. KIẾN NGHỊ . 70
TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC