Báo Cáo Công nghệ sản xuất Thu nhận enzime ficin từ trái sung

ĐẶC ĐIỂM CỦA ENZIME FICIN
1.Lịch sử nghiên cứu :
Đặc điểm nguồn thu nhận ficin:
Cây sung ngọt
có kích thước vùa hoặc nhỏ, cây cao từ 3-9m.

Cây có nhiều nhựa màu trắng đục.

Lá đơn, màu xanh sáng

Hoa nhỏ.

Quả dài từ 2,5-10 cm, màu sắc quả thay đổi từ vàng xanh đến đỏ đồng hay màu đỏ tía sậm.

Hạt có thể to, vừa hoặc nhỏ,
Theo tài liệu của Phân Khoa Nông Nghiệp Mỹ
ở Washington D.c,thành phần các chất trong 100g trái như sau:
TÍNH CHẤT CỦA ENZIME FICIN:
Cấu tạo hoá học:
Ficin l m?t protease th?c v?t trong c?u tr c b?t 1 cĩ ch?a nhĩm (-SH)



bảng thành phần amino acid của phân tử enzime ficin :
Pro – Leu – Arg – Gln - Gly – Glu – Cys – Gly – Ser – Cys – Tryp –
Tính chất vật lý:
Trọng lượng phân tử: 23.000-27.000

Nhiệt độ hoạt động: 30-80oC. nhiệt độ tối hảo cho hoạt tính xúc tác: 50-65oC.

Hệ số sa lắng: 2.5-2.7S.

Điểm đẳng điện: 9-10.

Không tan trong hầu hết các dung môi hữu cơ nhưng tan một phần trong nứơc và glycerin.

Tính chất vật lý của ficin ? các nguồn thu nhận khác nhau được trình bày ở bảng sau:
Tính chất hoá học
pH hoạt động tối thích của ficin rộng: 4-9.5 (dịch nhựa sung có pH 5),
gelatin: pHopt = 5;
casein: pHopt = 9.5;
hemoglobin: pHopt = 7.

Benzoyl-L-arginine ethyl ester, benzoyl-L-argininamide, hippurylamide và hippuryl methylester thì pHopt = 6.5.


Các yếu tố ảnh hưởng đến sự hoạt động của ficin
Các yếu tố hoạt hoá:
Nhân tố khử như: cyanide, cysteine, 1,2- dimercaptopropandol hoặc mercaptoethanol.

Cysteine hoặc 1,2- dimercaptopropandol nồng độ 0.005-0.05M HCN 0.075M làm tăng hoạt tính của ficin cao nhất .

Mặt khác, hoạt tính của ficin còn tăng hơn nữa khi phối hợp giữa HCN với cystein.


Các yếu tố kìm hãm:
Các chất ức chế như HgCl2, N- ethylmalenide, iodo acetic acid, chloroacetamide hay iodoacetamide kết hôp với trung tâm hoạt động của ficin thì enzime sẽ bị bất hoạt
Các chất kìm hãm hoạt động của các protease động vật khi liên kết với gốc cystein của enzime ficin cũng có thể làm bất hoạt ficin
Trong lòng trắng trứng có một loại protein có một loại protein có khả năng kìm hãm hoạt động của ficin.
Tính bền vững:
Bền vững với nhiệt độ: Cohen nhận thấy chúng có thể giữ nguyên hoạt tính trong 2h ở 50oC .
Bền vững với pH: trong một vùng pH khá rộng (4.5-9.5) độ bền vững của enzime ficin đạt đến mức cực đại .
-pH hẹp dao động quanh pH 8 thì nó lại có tính bền vững ở mức tối thiểu.
-Cơ chế xúc tác của enzyme:
Cơ chế thuỷ giải này gồm có hai giai đoạn:
Giai đoạn 1: giai đoạn "acyl hoá".
Giai đoạn 2: giai đoạn "deacyl hoá" có sự tham gia của phân tử nước.
Một số yếu tố khác ảnh hưởng lên khả năng thuỷ phân protein của ficin:
Nhiệt độ:
Hoạt động thuỷ giải protein của enzime ficin chịu ảnh hưởng rất nhiều bởi nhiệt độ

Độ pH:
Tác động vào trạng thái ion hoá của phân tử enzime.
Tác động vào trạng thái ion hoá của cơ chất.
Tác động vào độ bền của phân tử enzime.
Tác động vào sự kết hợp giữa phần protein và phi protein của phân tử enzime.
PHƯƠNG PHÁP THU NHẬN FICIN
Dịch nhựa sung
Pha nước cất
Khuấy tr?n
Ly tâm
Thu dịch bên trên
Thu lấy các phân đoạn
Loại
bỏ tủa
Tủa
bằng ethanol

Chế phẩm enzyme thô
Từ nhựa thân
Từ lá và quả xanh
Dịch nhựa sung
Pha nước cất
Khuấy tr?n
Ly tâm
Thu dịch bên trên
Thu lấy các phân đoạn
Loại
bỏ tủa
Tủa
bằng ethanol

Chế phẩm enzyme thô
lọc gel
Thu phân đoạn
enzyme
Chế phẩm
enzyme
Sấy khô
Enzyme thô
Xấc d?nh ho?t tính
cac phan do?n
Độn với tinh bột