Luận Văn Chuyển Plasmid chứa gene alkabk1, alkabk2 vào Rhodococcus opacus B4 để tăng năng suất tạo enzyme n-a

TÓM TẮT KHÓA LUẬN


Khóa luận nhằm tạo chủng Rhodococcus opacus B4 có biểu hiện của enzyme


n- alkane monooxygenase tăng so với dòng chưa biến nạp, bằng cách tạo plasmid chứa


gene alkB1/alkB2 rồi chuyển plasmid đó vào R. opacus B4.


Một số kết quả đạt được:


- Tạo được plasmid mới có promoter mạnh và có chứa gene alkB1/ alkB2.


- Tạo được dòng R. opacus B4 mới có biểu hiện gene alkB1/ alkB2 tăng so với


dòng tự nhiên.


- Đề xuất: kiểu bể phản ứng dành cho R. opacus.


MỤC LỤC


TRANG


Trang tựa


Lời cảm ơn . iii


Tóm tắt khóa luận .iv


Mục lục v


Danh sách các hình vii


Danh sách sơ đồ và bảng . viii


1. MỞ ĐẦU .1


1.1. Đặt vấn đề 1


1.2. Mục đích và yêu cầu 1


1.2.1. Mục đích 1


1.2.2. Yêu cầu 1


2. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2


2.1. Tầm quan trọng của sản xuất hóa chất bằng sinh vật 2


2.2. Giới thiệu chung về loài vi khuẩn Rhodococcus .3


2.3. Giới thiệu về Rhodococcus opacus B4 5


2.4. N- alkane monooxygenase 8


3. VẬT LIỆU VÀ PHưƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .11


3.1. Thời gian và địa điểm 11


3.2. Vật liệu 11


3.2.1. Chủng vi khuẩn và phương pháp nuôi cấy 11


3.2.2. Plasmid 11


3.2.3. PCR primers 11


3.2.4. Môi trường .12


3.3. Chiến lược thí nghiệm tổng quát .14


3.4. Phương pháp 15


3.4.1. Kỹ thuật .15


3.4.1.1. PCR 15


3.4.1.2. Thiết kế mồi .15


3.4.1.3. Sắc ký khí 16


3.4.2. Phương pháp 18


3.4.2.1. Phân lập Rhodococcus opacus B4 .18


3.4.2.2. Phương pháp khuếch đại đoạn gene bằng PCR .18


3.4.2.3. Phương pháp tách plasmid từ vi khuẩn .18


3.4.2.4. Ligation vào T- vector .19


3.4.2.5. Kỹ thuật blunt-end .19


3.4.2.6. Chuyển nạp bằng phương pháp shock nhiệt 19


3.4.2.7. Điện chuyển .20


3.4.2.8. Xác định hoạt tính enzyme 20


4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .22


4.1. Kết quả .22


4.2. Thảo luận .24


5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ .27


5.1. Kết luận 27


5.2. Đề nghị 27


6. TÀI LIỆU THAM KHẢO .28


DANH SÁCH CÁC HÌNH


Hình 2.1: Công nghiệp sản xuất hóa chất 2


Hình 2.2: Vi khuẩn Rhodococcus opacus B4 6


Hình 2.3: Mô hinh AlkB – alkane hydroxylase .8̀


Hình 4.1: Kết quả điện di sau khi xử lý enzyme cắt 22


Hình 4.2: Kết quả điện di sau khi xử lý bằng enzyme giới hạn EcoRI .22


Hình 4.3: Nồng độ các mảnh DNA sau khi tách từ gel band 23


Hình 4.4: Điện di kết quả PCR khuẩn lạc .23


Hình 4.5: Kết quả điện di khẳng định plasmid mới tạo .24