Luận Văn Chọn lựa điều kiện nuôi cấy và thu nhận enzyme chitosanase từ vi khuẩn Bacillus licheniformis

Đề tài: Chọn lựa điều kiện nuôi cấy và thu nhận enzyme chitosanase từ vi khuẩn Bacillus licheniformis

MỤC LỤC​
Lời cảm ơn. i
Danh mục chữ viết tắt v
Danh mục bảng. vi
Danh mục hình. vii
Danh mục đồ thị và sơ đồ viii
Phần I MỞ ĐẦU 1
1.1. Đặt vấn đề. 1
1.2. Mục tiêu. 2
Phần II TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3
2.1. Chitosan và chitosan oligosaccharide. 3
2.1.1. Cấu trúc và thành phần cấu tạo của chitosan và chitosan oligosaccharide. 3
2.1.2. Tính chất vật lí và tính chất hoá học của chitosan. 5
2.1.3. Ứng dụng của chitosan và chitosan oligosaccharide. 5
2.2. Enzyme chitosanase. 8
2.2.1. Khái niệm về enzyme chitosanase. 8
2.2.2. Nguồn nguyên liệu để thu nhận enzyme chitosanase. 9
2.2.3. Đặc điểm và cơ chế xúc tác của enzyme chitosanase. 9
2.3. Giới thiệu về vi khuẩn ưa nhiệt 12
2.3.1. Vi khuẩn. 12
2.3.2. Khái niệm vi khuẩn ưa nhiệt 12
2.3.3. Cơ chế chịu nhiệt ở vi sinh vật 13
2.3.4. Nhận diện vi khuẩn. 13
2.4. Các yếu tố ảnh hưởng đến khả năng sinh tổng hợp enzyme chitosanase từ vi sinh vật 14
2.4.1. Thành phần môi trường. 14
2.4.2. Điều kiện lên men. 15
2.5. Tình hình nghiên cứu trong và ngoài nước về enzyme chitosanase. 15
2.5.1. Tình hình nghiên cứu trên thế giới 15
2.5.2. Tình hình nghiên cứu trong nước. 17
Phần III VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18
3.l. Đối tượng, vật liệu và địa điểm nghiên cứu. 18
3.1.1 Đối tượng nghiên cứu. 18
3.1.2. Địa điểm . 18
3.1.3 Vật liệu nghiên cứu. 18
3.2. Phương pháp nghiên cứu. 19
3.2.1. Bảo quản và giữ giống. 19
3.2.2. Thử khả năng sinh tổng hợp enzyme chitosanase của vi khuẩn Bacillus licheniformis 19
3.2.3. Nuôi cấy mẫu giống có hoạt tính. 19
3.2.4. Xác định đường kính vòng phân giải của enzyme thô (phương pháp đục lỗ thạch) 19
3.2.5. Chuẩn bị cơ chất chitosan. 20
3.2.6. Xác định hoạt tính enzyme chitosanase bằng phương pháp acid dinitrosalicylic 20
3.2.7. Quan sát đặc điểm hình thái khuẩn lạc và hình thái tế bào của mẫu giống vi khuẩn được tuyển chọn. 22
3.2.8. Xác định đường cong sinh trưởng của mẫu giống vi khuẩn Bacillus licheniformis 22
Tiến hành nuôi mẫu giống vi khuẩn đã lựa chọn trong môi trường hoạt hoá, ở 480C, lắc 200 rpm. Cứ sau 2h lấy dịch nuôi cấy đem đo độ hấp thụ quang học (Absorbance) ở bước sóng 620nm (A620). 22
3.2.9. Chọn lựa điều kiện nuôi cấy cho vi khuẩn sinh tổng hợp enzyme chitosanase hoạt tính cao 23
3.2.10. Phương pháp xác định hàm lượng protein. 24
3.2.11. Thu nhận enzyme thô 25
3.2. 12. Phương pháp thống kê và xử lí kết quả. 26
Phần IV KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 27
4.1. Khả năng sinh tổng hợp enzyme chitosanase của mẫu giống vi khuẩn Bacillus licheniformis 27
4.2. Đặc điểm hình thái khuẩn lạc, tế bào của chủng vi khuẩn Bacillus licheniformis 30
4.2.1. Đặc điểm hình thái khuẩn lạc. 30
4.2.2. Đặc điểm hình thái tế bào 31
4.3. Chọn lựa thời gian tiếp giống và điều kiện nuôi cấy tối ưu để sinh tổng hợp enzyme chitosanase của vi khuẩn Bacillus licheniformis. 31
4.3.1. Thời gian tiếp giống. 31
4.4. Thu nhận enzyme chitosanase. 38
4.4.1. Nuôi cấy và thu nhận enzyme. 38
4.4.2 Cô đặc dịch enzyme thô 38
4.4.3. Tinh sạch sơ bộ enzyme chitosanase. 39
4.4.4. Đề xuất sơ đồ quy trình thu nhận enzyme chitosanase tử chủng vi khuẩn Bacillus licheniformis. 43
Phần V KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ. 44
5.1. Kết luận. 44
5.2. Đề nghị 44
TÀI LIỆU THAM KHẢO . 46