Báo Cáo Chọn lựa điều kiện nuôi cấy tối ưu và bước đầu thu nhận, tinh sạch enzyme Chitosanase từ xạ khuẩn

Đề tài: Chọn lựa điều kiện nuôi cấy tối ưu và bước đầu thu nhận, tinh sạch enzyme Chitosanase từ xạ khuẩn


Mục lục

PHẦN I: MỞ ĐẦU 1
1.1. Đặt vấn đề. 1
1.2. Mục đích và yêu cầu của đề tài 2
1.2.1. Mục đích. 2
1.2.2. Yêu cầu. 2
PHẦN II: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3
2.1 Giới thiệu chung về enzyme. 3
2.1.1 Sơ lược lịch sử của enzyme. 3
2.1.2 Cấu trúc enzyme. 4
2.1.3 Tính đặc hiệu của enzyme. 4
2.2 Enzyme chitosanase. 5
2.2.1 Cấu tạo Enzyme chitosanase. 5
2.2.2 Khối lượng phân tử của chitosanase. 6
2.2.3 Ảnh hưởng của các ion kim loại và các chất phản ứng lên hoạt tính của chitosanase. 6
2.2.4 Ảnh hưởng của pH, nhiệt độ lên hoạt tính của enzyme chitosanase. 7
2.2.5 Cơ chất của chitosanase. 8
2.3 Cơ chế tác dụng của chitosanase. 12
2.3.1 Vị trí liên kết bị cắt đứt bởi enzyme chitosanase. 12
2.3.2 Sản phẩm thủy phân chitosan. 15
2.4 Sản phẩm thủy phân chitosan từ chitosanase. 15
2.4.1 Chitosan Oligosaccharide. 15
2.4.2 Glucosamin. 17
2.5 Nguồn thu nhận Chitosanase. 18
2.5.1 Nguồn thu nhận Chitosanase. 18
2.5.2. Nguồn thu nhận chitosanase từ Streptomyces. 20
2.6 Xạ khuẩn. 20
2.6.1. Đặc điểm của xạ khuẩn. 20
2.6.2. Khuẩn ti xạ khuẩn. 21
2.6.3. Khuẩn lạc của xạ khuẩn. 22
2.6.4. Cấu tạo tế bào. 22
2.7 Tình hình nghiên cứu trong nước và ngoài nước của chitosanase. 23
2.7.1 Tình hình nghiên cứu chitosanase trên thế giới. 23
2.7.2 Tình hình nghiên cứu ở Việt Nam 28
PHẦN III. ĐỐI TƯỢNG- NỘI DUNG- PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 29
3.1 Đối tượng, địa điểm và thời gian nghiên cứu. 29
3.1.1 Đối tượng nghiên cứu. 29
3.1.2 Vật liệu. 29
3.1.2.1 Các môi trường đã sử dụng. 29
3.1.2.2 Các hóa chất đã sử dụng. 31
3.1.2.3 Các thiết bị sử dụng. 32
3.1.2.4 Địa điểm nghiên cứu. 32
3.1.2.5 Thời gian nghiên cứu. 32
3.2 Phương pháp nghiên cứu. 32
3.2.1 Phương pháp vi sinh. 32
3.2.2 Phương pháp Hóa sinh. 33
3.2.2.1 Xác định hoạt độ Enzyme Chitosanse. 33
3.2.2.2 Phương pháp xác định hàm lượng protein. 34
3.2.3 Tách enzyme chitosanase bằng phương pháp kết tủa amoni sulphat bão hoà 36
3.2.4 Phân đoạn enzyme bằng phương pháp lọc gel Sephadex G-25. 36

PHẦN IV: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 38
4.1 Khảo sát ảnh hưởng của nhiệt độ nuôi cấy, tỷ lệ tiếp giống đến khả năng sinh tổng hợp enzyme chitosanase từ chủng xạ khuẩn 14 (XK14). 38
4.2 Tinh sạch enzyme Chitosanase. 39
4.2.1 Xử lý sơ bộ enzyme Chitosanase. 39
4.2.2 Tinh sạch enzyme Chitosanase bằng muối (NH4)2SO4 bão hòa. 39
4.2.2.1 Tinh sạch enzyme Chitosanase bằng muối (NH4)2SO4 bão hòa từ chủng Streptomyces griseus 2. 39
4.2.2.2 Khảo sát thu nhận enzyme Chitosanase từ chủng xạ khuẩn Streptomyces griseus3 bằng muối amoni sulphat bão hòa. 40
4.2.2.3 Khảo sát thu nhận enzyme Chitosanase bằng kết tủa amoni sulphat từ chủng xạ khuẩn 14 (XK14) 40
4.2.3 Tinh sạch enzyme Chitosanase bằng sắc ký lọc gel Sephadex G- 25. 41
4.3 Quy trình tách chiết, tinh sạch enzyme Chitosanase. 43
4.4 Nghiên cứu một số tính chất của Chitosanase. 43
4.4.1 Ảnh hưởng của pH lên hoạt tính enzyme Chitosanase từ chủng Streptomyces griseus 2. 43
4.4.2 Khảo sát ảnh hưởng của pH lên hoạt tính của enzyme Chitosanase từ chủng Streptomyces griseus 3. 45
4.4.3 Khảo sát tỷ lệ Enzyme- cơ chất lên hoạt tính của Enzyme chitosanase từ chủng xạ khuẩn Streptomyces griseus2. 46
4.4.4 Khảo sát ảnh hưởng tỷ lệ E/S lên hoạt tính của enzyme Chitosanase từ chủng SG3. 47
4.4.5 Khảo sát ảnh hưởng của nồng độ cơ chất lên hoạt tính enzyme Chitosanase từ chủng SG2. 48
4.4.6 Khảo sát ảnh hưởng của nồng độ cơ chất lên hoạt tính của enzyme Chitosanase từ chủng SG3. 50
PHẦN V: KẾT LUẬN 51
5.1 Kết luận. 51
5.1.1. Đối với chủng XK14. 51
5.1.2. Đối với chủng Streptomyces griseus2. 51
5.1.3. Đối với chủng Streptomyces griseus3. 51
5.2 Kiến Nghị 51