Luận Văn Bước đầu xây dựng quy trình nhuộm nhiễm sắc thể trên tế bào máu Thỏ

TÓM TẮT
​

MAI MINH MẪN, Đại học Nông Lâm Tp. Hồ Chí Minh. Tháng 8/2007. “BưỚC ĐẦU XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHUỘM NHIỄM SẮC THỂ TRÊN TẾ BÀO MÁU THỎ” Giáo viên hướng dẫn: ThS. Hồ Thị Nga BSTY. Nguyễn Kiên Cường Đề tài được thực hiện tại Phòng thí nghiệm Sinh lý Khoa Chăn Nuôi Thú Y, Đại Học Nông Lâm Tp Hồ Chí Minh trên đối tượng thỏ. Nhiễm sắc thể là yếu tố ảnh hưởng đến sự di truyền của một giống loài. Xây dựng được kiểu nhân của một loài là bước đầu cho việc nghiên cứu sâu hơn về cơ chế di truyền của loài đó. Phương pháp hiệu quả nhất trong nghiên cứu kiểu nhân là nuôi cấy tế bào bạch cầu của máu và nhuộm. Máu thỏ nuôi cấy với hai liều lượng là 0,4 ml và 1 ml trong môi trường RPMI 1640 có bổ sung một số chất giúp cho sự sinh trưởng và phát triển tế bào như huyết thanh phôi bò (FBS), Pokeweed (lectin), kháng sinh antimycotic – antibiotic. Mẫu máu được nuôi cấy chủ yếu bằng chai Rough trong 72 giờ ở 37 0C trong tủ ấm CO2. Sau 72 giờ, cho thêm 40 àl colcemid vào môi trường và ủ theo ba mức thời gian 20 phút, 40 phút và 60 phút trước khi xử lý để nhuộm. Bên cạnh đó ống nghiệm 15 ml cũng được sử dụng để nuôi cấy thử nghiệm. Kết quả cho thấy khi nuôi cấy 1ml máu thỏ với môi trường RPMI 1640 trong 72 giờ ở 37 0C và ủ với colcemid trong thời gian 60 phút thì thu được tế bào ở giai đoạn trung kỳ nhiều nhất. Ngoài ra, khi nuôi cấy máu thỏ với ống nghiệm 15 ml vẫn thu được các tế bào ở giai đoạn trung kỳ. Mặc dù vậy, chúng tôi vẫn chưa xây dựng được kiểu nhân (karyotype) của bộ nhiễm sắc thể thỏ do nhiễm sắc thể chưa trãi đều khi nhuộm.
MỤC LỤC
Trang
Lời cảm tạ iii
Tóm tắt iv
Summary v
Mục lục vi
Danh sách các chữ viết tắt . ix
Danh sách các bảng . x
Danh sách các hình xi
Chương 1 MỞ ĐẦU 1
1.1 Đặt vấn đề 1
1.2 Mục tiêu và yêu cầu . 2
1.2.1 Mục tiêu . 2
1.2.2 Yêu cầu . 2
Chương 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3
2.1 Tổng quan về thỏ 3
2.1.1 Phân loài . 3
2.1.2 Một số đặc điểm sinh lý . 3
2.1.3 Đặc điểm của máu thỏ 3
2.2 Nhiễm sắc thể . 4
2.2.1 Khái niệm . 4
2.2.2 Hình thái và kích thước 4
2.2.3 Số lượng nhiễm sắc thể 5
2.2.4 Cấu trúc nhiễm sắc thể . 6
2.2.4.1 Cấu trúc hiển vi của nhiễm sắc thể . .6
2.2.4.2 Cấu trúc siêu vi của nhiễm sắc thể . 8
2.3 Chu Kỳ sống của tế bào . 9
2.3.1 Gian kỳ . 9
vii
2.3.1.1 Pha G1 10
2.3.1.2 Pha S . 10
2.3.1.3 Pha G2 10
2.3.1.4 Phân bào . 10
2.3.2 Nguyên phân 11
2.3.2.1 Đặc điểm của nguyên phân 11
2.3.2.2 Các kỳ của phân bào 12
2.4 Sơ lược các kỹ thuật nghiên cứu nhiễm sắc thể 14
2.4.1 Kỹ thuật splash . 14
2.4.2 Kỹ thuật squash 16
2.5 Nghiên cứu về kiểu nhân nhiễm sắc thể thỏ 16
Chương 3 NỘI DUNG VÀ PHưƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM . 20
3.1 Thời gian và địa điểm . 20
3.2 Đối tượng . 20
3.3 Nội dung nghiên cứu 20
3.4 Vật liệu và hóa chất 20
3.4.1 Thiết bị . 20
3.4.2 Dụng cụ 21
3.4.3 Hóa chất . 21
3.5 Bố trí thí nghiệm 23
3.5.1 Thí nghiệm 1 23
3.5.2 Thí nghiệm 2 23
3.5.3 Thí nghiệm 3 24
3.5.4 Chỉ tiêu quan sát . 24
3.6 Phương pháp tiến hành . 24
3.6.1 Phương pháp lấy máu thỏ . 24
3.6.1.1 Phương pháp lấy máu tim 24
3.6.1.2 Phương pháp lấy máu động mạch tai . 24
3.6.2 Phương pháp nuôi cấy tế bào máu 25
3.6.3 Kỹ thuật nhuộm nhiễm sắc thể 26
3.6.3.1 Kỹ thuật trãi đều nhiễm sắc thể 26
3.6.3.1 Nhuộm nhiễm sắc thể với giemsa 27
3.7 Xử lý số liệu . 27
CHưƠNG 4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 28
4.1 Kết quả nhuộm theo thời gian ủ với colcemid . 28
4.2 Kết quả nhuộm theo lượng máu nuôi cấy 29
4.3 Kết quả nuôi cấy thử nghiệm trên ống ly tâm 15ml . 31
4.4 Một số nguyên nhân ảnh hưởng tới kết nuôi cấy và nhuộm 35
CHưƠNG 5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 38
5.1 Kết luận 38
5.2 Đề nghị . 38
CHưƠNG 6. TÀI LIỆU THAM KHẢO 39