Luận Văn Bước đầu thụ tinh trong ống nghiệm trên chó (67 trang)

Bước đầu thụ tinh trong ống nghiệm trên chó

Mục Lục

Chương 1 : MỞ ĐẦU .

1 1.1 Đặt vấn đề .
1 1.2 Mục tiêu .
2 1.3 Yêu cầu . 2

Chương 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3

2.1 Buồng trứng 3
2.1.1 Vị trí, hình thái 3
2.1.2 Cấu tạo . 3
2.1.3 Chức năng . 3
2.2 Nang noãn 4
2.2.1 Đặc điểm hình thái 4
2.2.2 Sự phát triển của nang noãn 4
2.2.3 Nội tiết nang tăng trưởng 6
2.2.4 Sự trưởng thành của nang noãn . 7
2.2.4.1 Trưởng thành nhân 7
2.2.4.2 Trưởng thành tế bào chất 8
2.2.5 Sự rụng trứng 9
2.3 Nuôi chín trứng trong ống nghiệm (In vitro maturation - IVM) 9
2.3.1 Lịch sử IVM 9
2.3.2 Môi trường IVM 10
2.3.2.1 Các loại môi trường IVM . 10
2.3.2.2 Thành phần trong môi trường IVM 10
2.3.3 Các yếu tố ảnh hưởng đến kết quả IVM . 12
2.3.3.1 Thời gian . 12
2.3.3.2 Chất lượng noãn và kích thước nang noãn . 13
2.3.3.3 Tuổi và tình trạng sinh dục chó cái . 13
2.3.3.4 Thời gian và nhiệt độ bảo quản mẫu buồng trứng 13
2.4 Phó tinh hoàn . 13
2.5 Tinh trùng 15
2.5.1 Nguồn gốc và hình dạng . 15
2.5.2 Quá trình sinh tinh . 16
2.5.3 Cấu tạo . 16
2.5.4 Thành phần 17
2.5.5 Đặc tính sinh lý . 17
2.5.6 Các yếu tố ảnh hưởng đến hoạt động của tinh trùng . 18
2.6 Thụ tinh trong ống nghiệm (in vitro fertilization-IVF) 19
2.6.1 Lịch sử IVF . 19
2.6.2 Cơ chế của sự thụ tinh . 20
2.6.3 Các giai đoạn phát triển của phôi 21
2.6.4 Vật liệu cho IVF . 22
2.6.4.1 Giao tử 22
2.6.4.2 Môi trường IVF . 22
2.6.5 Các hệ thống thụ tinh in vitro 23
2.6.6 Đánh giá kết quả thụ tinh . 24
2.6.7 Các yếu tố ảnh hưởng đến IVF . 25

Chương 3: VẬT LIỆU PHưƠNG PHÁP 26

3.1 Thời gian và địa điểm tiến hành 26
3.2 Nội dung nghiên cứu . 26
3.3 Vật liệu . 26
3.3.1 Nguồn mẫu 26
3.3.2 Hóa chất . 27
3.3.2.1 Hóa chất dùng cho trứng . 27
3.3.2.2 Hóa chất dùng cho tinh trùng 29
3.3.2.3 Hóa chất dùng cho thụ tinh . 30
3.3.3 Dụng cụ - thiết bị . 31
3.3.3.1 Dụng cụ . 31
3.3.3.2 Thiết bị 31
3.4 Bố trí thí nghiệm . 32
3.4.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát nồng độ β-mercaptoethanol sử dụng để nuôi chín trứng 32
3.4.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát nồng độ orcein phù hợp cho quy trình nhuộm trứng . 32
3.4.3 Thí nghiệm 3: So sánh hiệu quả thụ tinh trong môi trường Fert-TALP và TYH 32
3.5 Phương pháp tiến hành 33
3.5.1 Thu nhận buồng trứng tại lò mổ 33
3.5.2 Xử lý buồng trứng . 35
3.5.3 Tìm và rửa trứng . 35
3.5.4 Phân loại trứng trước khi nuôi 35
3.5.5 Nuôi trứng . 36
3.5.6 Thu nhận và đánh giá trứng sau khi nuôi 36
3.5.6.1 Thu nhận trứng sau khi nuôi . 36
3.5.6.2 Đánh giá trứng sau khi nuôi 37
3.5.7 Nhuộm trứng . 38
3.5.8 Thu nhận tinh hoàn tại lò mổ 39
3.5.9 Thu tinh trùng và hoạt hóa tinh trùng . 39
3.5.9.1 Quy trình thu nhận và hoạt hóa tinh trùng 39
3.5.9.2 Các chỉ tiêu đánh giá tinh trùng trong thụ tinh in vitro: . 39
3.5.10 Phương pháp thụ tinh 40
3.5.10.1 Thụ tinh bằng môi trường Fert-TALP 41
3.5.10.2 Thụ tinh bằng môi trường TYH 42
3.6 Xử lý số liệu 42

Chương 4: KẾT QUẢ THẢO LUẬN 43

4.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát hiệu quả nuôi trứng khi bổ sung các nồng độ β-mercaptoethanol . 43
4.2 Thí nghiệm 2 : Khảo sát nồng độ orcein phù hợp cho quy trình nhuộm trứng 44
4.3 Thí nghiệm 3 : So sánh hiệu quả thụ tinh trong môi trường TYH và Fert - TALP . 47
4.4 Một số kinh nghiệm trong IVF . 48
4.4.1 Lấy mẫu . 48
4.4.2 Thao tác trong phòng thí nghiệm . 49

Chương 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ . 50

5.1 Kết luận 50
5.2 Đề nghị . 50