Luận Văn Bước đầu tạo cây tiêu (Piper nigrum) invitro kháng nấm Phytophthora sp

TÓM TẮT


Đề tài “Bước đầu tạo cây tiêu (Piper nigrum) in vitro kháng nấm


Phytophthora sp.” được tiến hành giai đọan đầu là giai đoạn tạo ra cây tiêu trong phòng


thí nghiệm tại Bộ môn Công Nghệ Sinh Học và Bộ môn Bảo Vệ Thực Vật – Trường Đại


Học Nông Lâm TP. Hồ Chí Minh từ tháng 2 đến tháng 6 năm 2006.


Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng của dịch chiết nấm Phytophthora đến


khả năng hình thành chồi từ mô sẹo tiêu


Tạo mô sẹo từ mẫu lá cây tiêu in vitro


Thí nghiệm được thực hiện trên môi trường MS có bổ sung 1mg/L 2,4D và 3mg/L


BA.


Nuôi cấy tạo dịch nấm Phytophthora


Thí nghiệm chủng dịch nấm Phytophthora trong môi trường nuôi cấy


mô sẹo cây tiêu


Thực hiện chủng dịch nấm Phytophthora vào môi trường nuôi cấy mô sẹo tiêu


với nhiều nồng độ dịch nấm khác nhau. (bảng bố trí thí nghiệm).


Thí nghiệm 2: Nhuộm mẩu mô sẹo


Nhuộm mẫu bằng phẩm nhuộm hai màu là dung dịch gồm hai thứ phẩm nhuộm:


- Phẩm đỏ Carmin sẽ nhuộm màu hồng lạt hay tím lạt nếu màng tế bào bằng


chất cellulose pectic.


- Phẩm xanh lục vert d’iod sẽ nhuộm màu xanh lục nếu màng tế bào bằng chất


gỗ (ligin) hay bần (suberin).

Bố trí thí nghiệm chủng dịch nấm Phytophthora trong môi trường


nuôi cấy mô sẹo cây tiêu


Phương pháp Nghiệm Nồng độ Số Tổng số

Số mẫu/chai

vô trùng thức dịch nấm (%) chai mẫu


DC 0 15 2 30


CC 5 15 2 30


Hấp khử trùng CB 10 15 2 30


CA 20 15 2 30


KC 5 15 2 30


Lọc vô trùng KB 10 15 2 30


KA 20 15 2 30


Ghi chú: DC: đối chứng có nồng độ dịch nấm là 0%, CC: nồng độ dịch nấm 5%


có hấp khử trùng, CB: nồng độ dịch nấm 10% có hấp khử trùng, CA: nồng độ dịch nấm


20% có hấp khử trùng, KC: nồng độ dịch nấm 5% lọc vô trùng, KB: nồng độ dịch nấm


10% lọc vô trùng, KA: nồng độ dịch nấm 20% lọc vô trùng.


MỤC LỤC


Trang


LỜI CẢM ƠN i


TÓM TẮT .ii


MỤC LỤC .iv


DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT .vii


DANH SÁCH CÁC BẢNG viii


DANH SÁCH CÁC HÌNH .ix


PHẦN 1. GIỚI THIỆU . 1


1.1Đặt vấn đề . 1


1.2Mục đích .2


1.3Yêu cầu .2


1.4Giới hạn đề tài .2


PHẦN 2. TỔNG QUAN TÀI LIỆU .3


2.1 Nguồn gốc và lịch sử phát triển cây tiêu 3


2.2 Tình hình sản xuất và tiêu thụ hạt tiêu trên thế giới và Việt Nam .3


2.2.1 Thế giới 3


2.2.2 Việt Nam 4


2.2.2.1 Tình hình sản xuất .4


2.2.2.2 Tình hình tiêu thụ 7


2.3 Tình hình bệnh trên cây tiêu .8


2.3.1 Bệnh chết nhanh dây tiêu do nấm Phytophothra gây ra 8


2.3.2 Điều kiện phát sinh bệnh, phát triển bệnh 9


2.4 Giới thiệu về giống Phytophthora 9


2.5 Lịch sử phát triển của nuôi cấy mô tế bào thực vật 10


2.6 Sự hình thành và phát triển của mô sẹo 15


2.6.1 Sự hình thành mô sẹo . 15


2.6.2 Sự hình thành chồi từ mô sẹo . 17


2.7 Các nhóm chất kích thích ảnh hưởng lên quá trình tạo mô sẹo . 17


2.7.1 Auxin 17


2.7.1.1 Tính chất sinh lý của Auxin . 18


2.7.1.2 Auxin trong cây trồng 18


2.7.1.3 Các chất auxin tổng hợp 19


2.7.2 Cytokinine 19


2.7.2.1 Tính chất sinh lý của Cytokinine .20


2.7.2.2 Cytokinine trong cây trồng 20


2.8 Một số nghiên cứu tạo cây kháng


bệnh bằng phương pháp nuôi cấy in vitro 20


PHẦN 3. VẬT LIỆU VÀ PHưƠNG PHÁP 22


3.1 Thời gian và địa điểm nghiên cứu 22


3.2 Thiết bị và dụng cụ phòng thí nghiệm 22


3.2.1 Phòng chuẩn bị môi trường .22


3.2.2 Phòng cấy cây 22


3.2.3 Phòng cấy nấm .22


3.2.4 Phòng nuôi cây .23


3.2.5 Môi trường cơ bản dùng trong thí nghiệm .23


3.3. Vật liệu nuôi cấy 23


3.4. Phương pháp thí nghiệm 24


3.4.1 Thí nghiệm : Ảnh hưởng của dịch chiết


nấm Phytophthora đến khả năng hình thành chồi từ mô sẹo tiêu .24


3.4.1.1 Tạo mô sẹo từ mẫu lá cây tiêu in vitro 24


3.4.1.2 Nuôi cấy tạo dịch nấm Phytophthora 24


3.4.2.3 Thí nghiệm chủng dịch nấm Phytophthora


trong môi trường nuôi cấy mô sẹo cây tiêu .25


3.4.4 Nhuộm mẫu mô sẹo và xem kết quả dưới kính hiển vi .27


3.5 Phân tích thống kê 27


PHẦN 4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 28


4.1 Thí nghiệm : Ảnh hưởng của dịch chiết nấm


Phytophthora đến khả nằng hình thành chồi từ mô sẹo tiêu 28


4.1.1 Tạo mô sẹo từ mẫu lá cây tiêu in vitro .28


4.1.2 Thí nghiệm chủng dịch nấm Phytophthora trong


môi trường nuôi cấy mô sẹo cây tiêu .28


4.3 Nhuộm mẫu mô sẹo tiêu sau 10 tuần nuôi cấy .34


PHẦN 5. KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 37


5.1 Kết luận .37


5.2 Kiến nghị 37


TÀI LIỆU THAM KHẢO 38


MỤC LỤC 1 .39


MỤC LỤC 2 .40